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PCR
來(lái)源：萬(wàn)物生物 發(fā)布時(shí)間：2021-11-02
PCR
一、實(shí)驗(yàn)原理
PCR 全稱聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（英文：Polymerase chain reaction），是利用DNA雙鏈復(fù)制的原理，在生物體外大量擴(kuò)增特定DNA片段的分子生物學(xué)技術(shù)，其特點(diǎn)是可以以微量的DNA為模板，快速擴(kuò)增得到大量拷貝。原理是基于DNA 半保留復(fù)制與堿基互補(bǔ)配對(duì)原則，是在體外模擬DNA的天然復(fù)制過(guò)程，主要由‘變性-退火-延伸’這三個(gè)基本步驟構(gòu)成，變性：DNA雙鏈在高溫條件（95℃）下解旋形成單鏈；退火：降低溫度可使引物結(jié)合到單鏈DNA上，DNA聚合酶結(jié)合到引物上；延伸：DNA 聚合酶在其最適反應(yīng)溫度（72℃）開(kāi)始沿著DNA鏈5'-3' 方向合成互補(bǔ)鏈。隨著PCR 的進(jìn)行，生成的DNA本身將作為模板，從而啟動(dòng)鏈?zhǔn)椒磻?yīng)，原始DNA模板被指數(shù)擴(kuò)增。
二、實(shí)驗(yàn)試劑
Taq酶，M-MLV逆轉(zhuǎn)錄酶，dNTPs， DEPC處理水，雙蒸水
三、實(shí)驗(yàn)儀器
電泳儀， PCR儀，高速離心機(jī)，移液器，電泳儀，電泳槽，紫外分析儀
四、操作步驟
1．cDNA的合成
逆轉(zhuǎn)錄體系的組成：
2．PCR擴(kuò)增特異性片段
25ul PCR體系的組成：
五、實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)
整個(gè)操作始終注意避免RNA酶的污染；
PCR反應(yīng)靈敏，注意避免試劑污染；
酶易失活，整個(gè)操作注意在冰上進(jìn)行。
設(shè)立對(duì)照：陽(yáng)性對(duì)照：陽(yáng)性模板，陰性對(duì)照：陰性模板，試劑對(duì)照：除模板外的所有組分。
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標(biāo)書基金實(shí)驗(yàn)咨詢 表觀遺傳組學(xué)分析
課題實(shí)驗(yàn)結(jié)題指導(dǎo) 細(xì)胞分子功能驗(yàn)證
實(shí)驗(yàn)培訓(xùn)文章潤(rùn)色 動(dòng)物模型裸鼠成瘤
臨床檢測(cè)科研轉(zhuǎn)化 病理染色分子互作